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本制品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料、Mg²⁺和校正染料ROX，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的GoldStar Taq DNAPolymerase是一种经全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶在95℃下孵育3min即可激活。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，适用于以Low ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。该产品灵敏度高，精确定量低拷贝的模板。使用本制品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

• 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
  
• 本制品中含有SYBR Green I荧光染料和ROX染料，保存本制品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
  
• 本制品中ROX含量较低，适用于ABI7500、Stratagene Mx3000、3005、4000等仪器。
  
• 避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本制品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
  
• 本品不能用于探针法荧光定量PCR。

• PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  2×BalbExcel UltraSYBR PCR Mix(含ROX)	25μL	1×
  Forward Primer,10μM	0.5～1μL	0.1～0.2μM
  Reverse Primer,10μM	0.5～1μL	0.1～0.2μM
  Template DNA	2μL	-
  RNase-Free ddH2O	至50μL	-

  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
    
  • 通常DNA模板的量以10～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
• PCR反应程序
  
  • 若PCR产物的长度小于150bp并且引物的最佳退火温度在58～65℃范围内，按两步法的反应程序进行qPCR。
    

    步骤	温度	时间	循环数
    预变性	95℃	3min	1
    变性	95℃	20 s	40
    退火/延伸/数据采集	60℃	30s
    熔解曲线分析	按照仪器要求进行设置

  • 若PCR产物的长度大于150bp或者引物的最佳退火温度不在58～65℃范围内，按三步法的反应程序进行qPCR。
    

    步骤	温度	时间	循环数
    预变性	95℃	3min	-
    变性	95℃	15 s	40
    退火	最佳退火温度	20 s
    延伸/数据采集	72℃	25 s
    熔解曲线分析	按照仪器要求进行设置